【作者】孙墨可张曼田娟李晓薇李海燕李玉

【机构】白城市农业科学院生物技术实验室吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心吉

摘要：灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80%。通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3–4/μgpSB130NG-LZ8+107个原生质体。转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达。

基金：吉林省重点科技攻关项目(20150204027NY)~~；

关键词：灵芝; 双T-DNA载体; 目的基因LZ-8; PEG转化法; 荧光定量PCR;