摘要：设计能够鉴定小菇属真菌(Mycena sp.)的引物,可准确而快速发现萌发菌分离材料,从而分离小菇属真菌,对提高天麻种子萌发率及天麻产量具有重要现实价值。同时对全面了解小菇属真菌在自然环境中的物种分布情况具有一定生态学意义。根据适用于检测"环境DNA"中某物种的引物设计验证框架,运用Primer Premier v5.0软件,在ITS序列区间内设计了适用于小菇属真菌DNA快速检测的5对引物,并对他们的特异性、灵敏度和实际运用能力进行了评估。其中,特异性较好的4对引物分别为M52-2、M22-3、M11-4和BZZ-5。通过对来自3个门、125个属的125株真菌进行特异性测试,能测出的菌株数量分别为2.4%、6.4%、4.0%和7.2%。灵敏度较好的M22-3和BZZ-5两对引物能检测到小菇属真菌菌丝在土壤中的最小浓度均为0.033%,且能成功从天麻原球茎和种子萌发菌塘土壤样本总DNA中检测出小菇属真菌的存在。结果表明,经过利用2对和多对引物,可在实际运用中快速筛选和发现小菇属真菌。
基金：国家自然科学基金(31360153)； 2015年度昭通天麻共生优良"两菌"选育项目(201501)；
关键词：天麻萌发菌; 兰科植物; ITS基因; 灵敏度; 快速筛选;
