【作者】蒋婧婧 马忠友 李佳丽 刘振邦 黄勃 李增智
【机构】安徽农业大学微生物防治省重点实验室 安徽科技学院生物系
摘要：经对比,萨氏麦芽糖-酵母浸粉培养液(SMY)较适合制备莱氏野村菌Nomuraea rileyi芽生孢子。以菌株Nr09接种该培养基,在130r/min、25℃全光照下震荡培养,观察芽生孢子在不同时期发育的形态变化。结果表明,分生孢子萌发产生芽管;24h萌发率为42%,36h时达84%。芽管迅速伸长形成菌丝。在48h前芽生孢子通过菌丝顶端及分枝末端缢缩的方式形成,后期则主要通过芽生孢子继续出芽的方式大量形成,78h芽生孢子数量达到最大值。芽生孢子的形成方式可为一端、两端或多端芽殖。芽生孢子的形成过程可分为5个阶段:(I)分生孢子膨大期;(II)芽管萌发期;(III)芽管延长期;(IV)芽生孢子形成初期;(V)芽生孢子指数生长期。30h后培养液中有少量草酸钙结晶出现并逐渐增多。到84h时有31%的芽生孢子细胞内液泡聚集增大,表明芽生孢子已开始进入衰老阶段。使用指数生长期制备的Nr09芽生孢子进行几丁质酶基因转化,转化效率达79个转化子/μgDNA。
基金："863"计划(No.2006AA10A212)； 国家自然科学基金(No.30972368)； 教育部高等学校博士点专项科研基金(No.200503644001)； 安徽省高校省级自然科学研究重点项目(No.TD200708)；
关键词：分生孢子; 萌发; 芽管; 草酸钙结晶; 液泡; 基因转化;