首页›技术›生理生化›正文
AI 数据脉搏 · 技术
技术内容 9533▲ 已收录 当前栏目 38▼ 生理生化

CTAB法提取食用菌DNA

日期:2011-07-01 正文 627 字 · 阅读约 2 分钟2104 阅读微博QQ空间复制链接
◆ 内容导读技术 · 生理生化

参考:王关林,方宏筠主编,植物基因工程[M].第2版,北京:科学出版社,2002,742-744. 1) 取1克菌丝放入研钵,加入液氮迅速研磨成粉末,转入7 mL的离心管,加2.5mL 65℃预热的抽提液(2 %(m/v)CTAB,100m mol/L Tris-HCl PH8.0,20mmol/L EDTA PH8.0,1.4mol/L NaCl),加巯基乙醇50μl,震荡,使蛋白质变性沉淀; 2) 65℃水浴1 h,每隔10 min振荡1次,加... 关键词:CTAB法提取食用菌DNA、生理生化

参考:王关林,方宏筠主编,植物基因工程[M].第2版,北京:科学出版社,2002,742-744.

1) 取1克菌丝放入研钵,加入液氮迅速研磨成粉末,转入7 mL的离心管,加2.5mL 65℃预热的抽提液(2 %(m/v)CTAB,100m mol/L Tris-HCl PH8.0,20mmol/L EDTA PH8.0,1.4mol/L NaCl),加巯基乙醇50μl,震荡,使蛋白质变性沉淀;

2) 65℃水浴1 h,每隔10 min振荡1次,加入2.5 mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀,除去蛋白质;

3) 8000 rpm,4℃离心10 min,取上清;

4) 加1/5体积65 ℃预热的CTAB/NaCl混匀,加入2.5 mL的氯仿:异戊醇(24:1)混匀;

5) 10000 rpm, 4℃离心10 min,取上清,加入2.5 ml的CTAB沉淀液,颠倒,混匀。65℃水浴1.5h至沉淀可见;

6) 12000 rpm,4℃离心10 min后,去除上清液,用0.5ml无菌水溶解沉淀10 min;

7) 加入0.25 mL饱和酚和0.25 mL氯仿:异戊醇(24:1),混匀;

8) 12000 rpm,4℃离心10 min,取上清,加入2倍体积预冷的无水乙醇,混匀,-20 ℃冰箱放置30 min;

9) 12000 rpm,4℃离心10 min;弃上清,加70%乙醇洗涤沉淀2次,自然风干,再加100μlTE溶解,-20 ℃保存备用。

◈ 数据洞察系统基于本条内容的实时指标
2104累计阅读
▲ +210 今日
0互动评论
— 待激活
2011-07-01发布节点
— 已收录
4680数据编号
✦ 已索引
举报收藏 0打赏 0评论 0
更多>相关评论
暂时没有评论,来说点什么吧
EMUSHROOM

始创于 2010年食用菌产业门户网站 · 资讯 / 技术 / 商务 / 社区

16+年运营时间
1万+个服务企业
200+场会展活动
100+次媒体支持
200+次直播场次
10万+信息发布
52万+条论坛帖子
20万+家注册企业
(c)2010-2026 Emushroom All Rights Reserved地址:武汉市东湖新技术开发区光谷大道35号光谷总部时代2栋1001室