食用菌灭菌器操作事项首先将锅内灭菌筐取出，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。
2．放回灭菌筐，关闭锅门。
3．向锅内通入蒸汽，并同时打开排气阀，以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。
4．灭菌所需时间到达后，打开排气阀，让灭菌锅内温度自然下降，打开盖子，取出灭菌物品。
5．将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。